background image

Practical Immunology and Serology

Hawler Medical University

College of Health Sciences

Medical Microbiology Dept.

Ass. Lec. Amer Ali Khaleel

(M.Sc. Medical Immunology) 

Lab.3

Immunochromatographic assays

 

3

rd

 stage


background image

Introduction:

Immunochromatographic 
assays, also called lateral 
flow dipstick immunoassay or 
simply strip tests,They are a 
logical extension of the 
technology used in latex 
agglutination tests, the first of 
which was developed in 1956 
by Singer and Plotz.


background image

Principal of Immunochromatography kit:

Principal of immunochromatography is the same as ELISA 
sandwich method, only difference is in that immunological 
reaction is carried out on the chromatographic paper 
by capillary action. For this system, two kinds of specific 
antibodies against antigen are used.One of the antibodies is 
immobilized on the chromatographic paper, and the other is 
labeled with colloidal gold and infiltrated into sample pad.

 

An immunochromatographic unit is completed by attaching the 
sample pad at the end of the membrane.


background image

Principal of Immunochromatography kit:

When the liquid sample is dropped on the sample pad, 
the antigen in the sample forms an immunocomplex with the 
antibody labeled with colloidal gold.
Its complex moves along with the liquid sample, and makes a 
contact with the antibody immobilized on the membrane, 
followed by forming an immunocomplex with the immobilized 
antibody, resulting in generating a colored red purple line. 

Appearance of red purple line on the membrane indicates 
the presence of antigen of interest in the sample. Since the liquid 
of the sample migrates through the membrane very fast, it 
makes it possible to detect the presence or absence of antigen 
within 15 minutes.


background image

Basic Components of Lateral flow test:

1. Sample pad.
2. Conjugate (detector) pad.
3. Detection conjugate.
4. Nitro-cellulose membrane.
5. Test and control reagent lines.
6. Absorbent (sink) pad.
7. Plastic-adhesive backing card.
The following components are “optional” 
and are not necessary or included in many 
lateral flow platforms:
8. Laminate Tape.
9. A Strip housing / Cassette.

Typical lateral flow test strip configuration

(Card, 

Cassette

, 

Dipstick

Strip)


background image

Lateral flow tests: how they work:

Step 1: Sample placement

To perform the test, a sample is placed on the sample pad at 
one end of the strip. The sample may be used alone as is 
commonly done with urine or serum or whole blood or plasma 
compatible tests, or it may be mixed with a buffer specific to the 
test.


background image

Lateral flow tests: how they work:

Step 2: Molecules solubilized

With the addition of the sample, the detector molecules are 
solubilized. When solubilized the detector molecules mix with 
and bind to the analyte in the sample (if analyte is present).


background image

Lateral flow tests: how they work:

Step 3: Capillary action

Then capillary action draws the fluid mixture up the sample pad 
and into the membrane. The sample/detector molecule mix 
continues to move up the membrane until it reaches the analyte 
capture molecule. In these lines a second (and third) antibody or 
antigen, immobilized as a thin stripe in the nitrocellulose will then 
capture the complex if it is positive for the target analyte. The 
control line should always show as a visible line, otherwise the 
test is invalid and must be repeated. If the test is positive, a 
colored (typically pink  or purple) line develops along with the 
control line.


background image

Lateral flow tests: how they work:

Step 4: Excess absorbed

Excess buffer along with any reagents not captured at the test of 
control line will then move into the absorbent wicking pad.


background image

The benefits of immunochromatographic 
tests includes:

1.Can detect antigen or antibody.
2.Commercially available.
3.Easy to perform.
4.Limited/no instrumentation.
5.Single use, rapid test.
6.User friendly format.
7.Very short time to get test result.
8.Long-term stability over a wide range of climates.
9.Relatively inexpensive to make.


background image

Limitations:

 

1-Results are qualitative.
2-Rapid tests can be less sensitive or less accurate compared to 
existing tests.

Includes
    Strip 
or Cassette 
or Multi-devices
or Midstream (hCG & LH only).

Test format:

Multi-devices


background image

Applications of Immunochromatographic 
assays:

It can be applied for multiple test platforms for liver, sexually 
transmitted diseases, cardiac markers, as well as women’s and 
men’s health (hCG, VDRL, CMV, PSA , H. Pylori, Troponin I, 
TORCH, HIV, HBsAg, HBV, HCV, FOB, RA, CRP, ASO, SLE, 
IM, Salmonella IgM & IgG , Toxoplasma IgG & IgM, Rubella IgG 
& IgM …).


background image

Any Questions ??!!!




رفعت المحاضرة من قبل: Abduljabbar Al-Kazzaz
المشاهدات: لقد قام 7 أعضاء و 232 زائراً بقراءة هذه المحاضرة








تسجيل دخول

أو
عبر الحساب الاعتيادي
الرجاء كتابة البريد الالكتروني بشكل صحيح
الرجاء كتابة كلمة المرور
لست عضواً في موقع محاضراتي؟
اضغط هنا للتسجيل